Pour prouver l’efficacité antibactérienne de notre gel hydroalcoolique, la coloration de gram à été plus que efficace.

Après réflexion, nous avons décidé d’élever des bactéries dans des tubes à essais, dans lesquels nous avons mélangé du yaourt, du liquide nutritif et de l’eau distillée.

Ensuite dans chaque tube nous avons ajouté une goutte de désinfectant pour voir son efficacité après une coloration de gram.

Coloration de Gram : expérience 4

Pour réaliser cette coloration de Gram il faut :

Matériel nécessaire :

•  Lames en verre
• Un pot de yaourt
• De l’eau distillée
• De l’alcool à 90°
• Gants
• Bec bunzen
• Papier absorbant
• Bac en plastique
• Un flacon de violet de gentiane
• Un flacon d’une solution de lugol
• De l’huile à immersion
• Un microscope optique

Protocole de la coloration de gram :

• On réalise un frottis sur une lame de microscope à partir d’une suspension bactérienne.
• On agite la suspension afin de l’homogénéiser et d’éviter d’avoir un culot au fond du tube.
• Avec l’aide d’une anse que l’on aura préalablement stérilisé (en la passant sous le bec benzène), on prélève un peu de la solution bactérienne en la plongeant dans le tube à essai.
• On dépose ensuite ce prélèvement au milieu de la lame en faisant des rotations jusqu’au séchage.
• On procède à la fixation du frottis soit avec de l’éthanol à 90° (5 minutes) puis on passe directement la lame au dessus de la flamme du bec Bunsen.
• La coloration au violet de Gentiane : la lame est plongée pendant 2 à 3 minutes (en fonction de la concentration) dans la coloration au violet de gentiane. Toutes les bactéries sont colorées en violet. Rincer la lame à l’eau.
• Stabilisation au lugol (solution iodo-iodurée) : étaler le lugol et laisser agir 20 secondes. Rincer à l’eau. Cette étape permet de stabiliser la coloration violette.
• Décoloration à l’alcool : verser goutte à goutte l’alcool sur la lame inclinée. Surveiller la décoloration (5 à 10 secondes). Le filet d’alcool doit être clair à la fin de la décoloration. Rincer sous un filet d’eau déminéralisée. L’alcool pénètre dans la bactérie. La coloration au violet de Gentiane disparaît.
• Observer

Site du protocole: http://www.technobio.fr/article-16615932.html

Comparaison, efficacité

Schéma de la coloration de gram

Pour observer les différentes colorations de gram, nous avons établi trois hypothèses :

• Si sur la plaque, on observe des petits ronds seuls on peut en déduire que ce sont des bactéries vivantes.
• Si les bactéries sont en ligne on peut en déduire que les bactéries sont en divisions. Donc lorsque la lame a été faite les bactéries étaient vivantes.
• Si il y a des amas de bactéries présents sur la lame, on considère que les bactéries sont mortes.

Dans un premier temps nous avons comparé trois solutions contenant chacune un produit présenté comme un antibactérien d’après nos recettes, avec une solution  »neutre » (sans antibactériens) pour étudier leur efficacité. Voici les résultats que nous avons obtenu.

Rôle Niaouli

Solution 3 : (témoin : sans alcool sans Niaouli sans Aloe vera ) sur cette lame on constate la présence de petits points ( bactéries) donc on suppose que les bactéries étaient vivantes au moment de la coloration.

Solution 8 : (sans alcool sans Aloe Vera avec Niaouli ) en comparaison avec la lame précédente on constate la présence d’amas de bactéries donc on suppose qu’elles sont mortes.

On peut donc en déduire que le Niaouli semble être un antibactérien.

Rôle alcool

Solution 3 : (témoin : sans alcool sans Niaouli sans Aloe vera ) sur cette lame on constate la présence de petits points (bactéries) donc on suppose que les bactéries étaient vivantes au moment de la coloration.

Solution 6 : on constate des amas de bactéries alors on en déduit que les bactéries étaient mortes au moment de la coloration.

On en déduit alors que l’alcool a tué les bactéries et qu’il est un antibactérien.

Rôle Aloe Vera

Solution 3 : (témoin : sans alcool sans Niaouli sans Aloe vera ) sur cette lame on constate la présence de petits points (bactéries) donc on suppose que les bactéries étaient vivantes durant la fixation.

Solution 5 : on observe peu d’amas de bactéries alors on suppose que l’Aloe Vera a peu agit sur les bactéries.

On peut alors en déduire que l’Aloe vera tue légèrement les bactéries mais son activité antibactérienne n’est pas forcément sûr car elle est beaucoup moins efficace que les deux précédents.

La recette de base contenant essentiellement de l’Aloe vera et des huiles essentielles est donc remise en question car l’efficacité du produit présenté comme antibactérien semble très faible.

Dans un second temps nous nous sommes demandé si deux antibactériens n’étaient pas plus efficaces qu’un seul, pour cela nous avons comparé une première solution contenant de l’alcool et du Niaouli avec deux solutions : une avec simplement du Niaouli et une autre avec simplement de l’alcool. Puis une seconde solution contenant de l’Aloe Vera et du Niaouli avec deux autres contenant simplement du Niaouli et simplement de l’Aloe Vera.

Rôle double

Solution 1: (Alcool + Niaouli) est-elle plus efficace que la solution 8 (Niaouli seul)

                        Solution 1                                                                                   Solution 8
Sur la lame 1 on observe des amas de bactéries mais à un grossissement x10 on ne peut pas savoir si l’élimination à été totale.

Ensuite dans la solution 8, on observe des amas de bactéries (donc mortes) ainsi que des bactéries vivantes.

On déduit que la solution 8 est sûrement moins efficace que la solution 1, le mélange alcool Niaouli est plus performant que le Niaouli seul.

Solution 1 :(Alcool + Niaouli) est-elle plus efficace que la solution 6 (Alcool seul)
                  

                        Solution 1                                                             Solution 6

Sur la lame 1 on observe des amas de bactéries mais au grossissement x10 on ne peut pas savoir si l’élimination a été totale.

Dans la solution 6 on voit des amas de bactéries mais au grossissement x10, on ne peut pas savoir si l’élimination est totale.

Donc le mélange alcool niaouli semblerait plus efficace que les deux autres solutions.

Solution 4: (Aloe Vera + Niaouli) est-elle plus efficace que la solution 5 (Aloe Vera seul)

                 
      Solution 4                                                           Solution 5

Sur la lame 4 on observe des gros amas de bactéries alors que sur la lame 5 il y a plein de bactéries seules, on déduit que la solution 4 est plus efficace que la solution 5.

On conclut que le mélange Aloe vera Niaouli est plus efficace que l’Aloe vera seul, et que le Niaouli a sûrement agit seul.

Solution 4: (Aloe Vera + Niaouli) est-elle plus efficace que la solution 8 (Niaouli seul)

       

    Solution 4                                                       Solution 8

Sur la lame 4 on observe moins d’amas de bactéries que dans la solution 8, on peut déduire que la solution 8 est plus efficace que la solution 4, donc que le Niaouli est très efficace et que l’Aloe vera n’a pas aidé a tuer les bactéries.